家畜繁殖学实验指导

实验三 死活精子数的测定

一、目的和要求

掌握死活精子染色和制作抹片的方法。

二、实验原理

活精子头部是不易着色的，镜检时，精子头部是透明、无色的。而死精子则因伊红渗入细胞质，使整个精子头部呈红色。苯胺黑为背景染色，使着色的精子头部可见。

三、材料

1．精液：牛、猪或兔等任一种动物的精液。

2．药品器械：显微镜、载玻片、凹玻片、搪瓷盘、滴管、擦镜纸、纱布、试管、75%酒精、5%伊红、1%苯胺黑。

四、方法和步骤

1.将5%的伊红和1%的苯胺黑按1:1混匀，分装于1～2ml容量的试管中（加入试管容量的1/2），并在37℃水浴中加温，随后加入原精液1～3滴，摇匀后再放回水浴中，3min后立即取出待用。也可将染液预热后，将伊红、精液及苯胺黑按照1：1：1～2的比例及顺序滴入预热的凹玻片中混匀染色。

2.从以上混合液中用火柴棍沾上一小滴于载玻片的一端，用另一载玻片进行推动制成抹片，待干燥后，高倍镜镜检（400倍）。抹片时，最好在35～40℃的条件下制作，而且制作过程要快。也可将制好的抹片放在37～38℃保温箱内干燥30～60秒。

结果：活精子头部是不易着色的，镜检时，精子头部是透明、无色的。而死精子则因伊红渗入细胞质，使整个精子头部呈红色。苯胺黑为背景染色，使着色的精子头部可见。在高倍镜下数200或500个精子，其中分别数出死、活精子各占的百分率。活精子百分率总是要比精子活率高。

活精子百分率＝×100%

五、作业