3. 血液生理

实验四  血红蛋白的测定

[目的]  熟悉用比色法测定血红蛋白的方法。

[原理]  血红蛋白本身的色泽，常随所结合的氧量多少而改变，不便于比色，但是，加稀盐酸于血液中，可使血红蛋白变成不易变色的高铁血红蛋白，然后用标准比色板比色，求出100 ml血液中所含血红蛋白的克数。

[实验动物] 兔

[器材及药品] 血红蛋白计、采血针、1/10 N盐酸、酒精棉球、蒸馏水等。

[方法及步骤]

1．将1/10N盐酸加人测定管中至刻度“2”或“10％“处。

  2. 用酒精棉球擦拭动物的采血部位后，用采血针刺破皮肤，干棉球拭去第一滴血，等第二滴血流出一大滴时，用吸血管插入流出的血滴深处，吸血至刻度“20”处；然后用干棉球拭净吸血管壁上的血液。

3. 小心地将吸血管内的血液吹入测定管底部的盐酸内，再吸测定管内上层透明的盐酸，反复吹吸几次，使吸血管壁上的血液全部进入测定管中。在进行吹吸时，要注意避免起泡。用玻璃棒将测定管中的盐酸与血液混合，放置10分钟。

  4．待测定管内液体完全成褐色后，徐徐滴入蒸馏水，并以玻璃棒搅拌之，同时进行比色，直至与比色箱中的标准比色板相同为止，此时可取出测定管，读出其中液体表面 (凹面) 的刻度。

  5. 测定管一般两边皆有刻度，其一边的刻度表示克数；如液体表面在刻度15处，即表示l00ml血液中含有15克血红蛋白；而另—边的刻度，表示百分率，它与克数之间的关系因血红蛋白计的型式而不同，可参照使用说明书。国产的沙里 (Sahli) 氏型血红蛋白计通常100％相当于14. 5克；如液体表面在刻度70％处，要计算其绝对克数，可用下列比例式求得：

    x　：14.5 ＝ 70　：100

            x ＝ 10.15(克)

唯二者的换算，常可由测定管两边的刻度直接读出。

6．实验完毕，清理和洗净仪器。

图15  血红蛋白计

1. 比色箱；2. 吸血管；3. 测定管

[注意事项]  

    1． 血液和盐酸作用的时间不可少于10分钟，否则，血红蛋白不能充分转变成高铁血红蛋白，使结果偏低。

2． 加蒸馏水时，开始可以稍多加几滴，随后则不能过快，以防稀释过头。

    3． 比色最好在自然光下(避免直射的阳光)，而不应在黄色光下进行，以免影响结果。

实验五  红细胞脆性试验

[目的]  测定红细胞细胞膜对不同低渗溶液的渗透抵抗力。亦即测定正常动物红细胞的渗透脆性。

[原理]  正常的红细胞系混悬于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞因失去内部液体而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水分进入红细胞，使红细胞两面凹陷的圆盘形变为球形，如继续膨大，即发生破裂溶解，形成溶血。红细胞脆性试验就是测定红细胞对低于0.9％ NaCl溶液的耐受能力。耐受力高者，红细胞不易破裂，即脆性低。反之，耐受力低者，红细胞易于破裂，即脆性高。

  凡上层液开始微呈淡红色，而极大部分红细胞下沉，称开始溶血或最小抗力(红细胞的最小抵抗力)。

  凡液体呈均匀红色，管底无红细胞下沉，则称完全溶血或最大抗力 (红细胞的最大抵抗力)。

[实验动物] 兔或鸡

[器材及药品] 试管，试管架，吸管，新鲜血（或去纤维蛋白血），1％NaCl，蒸馏水。

[方法与步骤]

1.先将试管分别排列在试管架上，按下表把1%NaCl稀释成不同浓度的低渗溶液，每管溶液均为2毫升。  

    试管号

稀释度

 

1

 

2

 

3

 

4

 

5

 

6

 

7

 

8

 

9

 

10

1%NaCl (毫升)

蒸馏水(毫升)

NaCl (％)

l.40

0.60

0.70

1.30

0.70

0.65

1.20

0.80

0.60

1.10

0.90

0.55

l.00

1.00

0.50

0.90

1.10

0.45

0.80

1.20

0.40

0.70

l .30

0.35

0.60

1.40

0.30

0.50

1.50

0.25

2．采取血液，并在上列各管中各加入大小相等的血液l滴，然后用拇指堵住试管口，将试管慢慢倒置一、二次，使血液与管内盐水混合均匀。

3．在室温下静置1小时，观察结果。

4．依上述说明判定出开始溶血及开始完全溶血的氯化钠百分比浓度。前者为红细胞的最小抗力，后者为红细胞的最大抗力。

[注意事项]

  1．配制的各种NaCl溶液必须准确。

  2．各管中加入的血滴大小应尽量相等并充分摇匀，但切勿用力震荡。

实验六  红细胞沉降率(血沉)的测定

[目的]  了解红细胞沉降率并掌握其测定方法。

[原理]  将加有抗凝剂的血液置于一特制的具有刻度的血沉管内，置于血沉架上，红细胞因重力作用而逐渐下沉，上层留下一层黄色透明的血浆。经一定时间，沉降的红细胞上面的血浆柱的高度，即表示红细胞的沉降率。家畜有的疾病可以引起红细胞沉降率的显著加速，故测定红细胞沉降率具有临床诊断价值。

[实验动物] 兔或鸡

[器材及药品] 血沉管，血沉管架，3.8％ 柠檬酸钠溶液，采血针，注射器等。

[方法与步骤]

1．保定实验动物。如用牛、马、羊采血，则剪去颈静脉附近的毛，用碘酊消毒，然后用消毒的采血针刺破颈静脉。当血液循采血针流出时，于其下承接一有刻度的试管，试管中预先加有3.8％的柠檬酸钠溶液作为抗凝剂，抗凝剂和血液的容积比例为1：4，如用兔采血，直接采其心血，采心血的方法是先在胸部左侧剪毛、消毒，然后用消毒过的注射器在左胸心跳最明显的部位，垂直刺入，即可吸取心血。注意：注射器中亦须事先盛有抗凝物质，其量视采血量而定，比例仍为1：4。 

图16  测定红细胞沉降率的装置

2．用清洁、干燥的血沉管小心地吸血至最高刻度“0”处。在吸血之前，须将血液充分摇匀 (但不可过份振荡，以免红细胞破坏)。吸血时，要绝对避免产生气泡，否则须重做。将吸有血液的血沉管垂直置于血沉管架上，分别在15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时，检查血沉管上部血浆的高度，以毫米表示之，并将所得结果记录于下表：

时间     

被检动物

15分钟 

30分钟  

45分钟

1小时

2小时

   

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

亦可用预先加抗凝剂的注射器采血，并用注射器直接将血液注入血沉管内， 这种方法的优点是节约用血，既准确又不易起泡。

[注意事项]

1． 实验应在采血后3小时内完毕，否则血液放置过久会影响实验结果的准确性。

2． 血沉管应垂直竖立，不能稍有倾斜。

3． 沉降率随温度的升高而加快，故应在室温22～27℃时测定为宜。

4.  血沉管必须清洁，如内壁不清洁可使血沉显著变慢。

实验七  血液凝固

[目的]  了解血液凝固的基本过程及影响血凝的一些因素。

[原理]  血液流出血管后，迅速发生凝固。血液凝固是一系列复杂的生化过程，大致可分为三个主要步骤，即 ① 凝血酶原激活物的形成；② 凝血酶原激活物催化凝血酶原转变为凝血酶；③ 凝血酶催化纤维蛋白原转变为纤维蛋白，从而形成血块。在这三个主要步骤中都需要Ca2+的参与。

[实验动物] 鸡或兔

[器材及药品] 试管、试管架、移液管、玻璃笔、烧杯、恒温水浴箱、秒表、3.8％柠檬酸钠溶液、5％草酸钾溶液、肝素、液体石蜡、1％氯化钙溶液、干棉球。

[方法与步骤]

(一) 影响血凝的物理因素

1．取试管3支，一支管内加少量棉花，一支管内壁涂少许液体石蜡，一支空白管作对照。

2．将以上三管分别加入新鲜血液2 ml，每30秒轻轻地倾斜试管一次，分别记录三管的凝血时间。分析凝血时间不同的原因。

(二) 温度对血凝的影响  取试管两支，分别加入新鲜血液2 ml。一管置于37℃水浴中，一管放在盛有冰块的水杯中，比较两管凝血时间。为什么不同?

(三) 钙离子对血凝的影响

1. 取试管3支，一支放入3.8％柠檬酸钠溶液6滴，一支加入5％草酸钾溶液6滴，一支空白对照。然后，再向各管分别加入2 ml新鲜血液，混合后观察血凝倩况，记录之。

2. 加入柠檬酸钠和草酸钾的试管分别再加1％CaCl2 2～4滴后，结果如何? 为什么?

(四) 肝素的作用  取一支试管放肝素16单位，再加入新鲜血液2 ml，摇匀后观察其结果。

(五) 割断动物的血管，将血液放入烧杯中，同时，用试管刷迅速搅动，以除去血中的纤维蛋白；将除去纤维蛋白的血液静置后，观察其能否凝固。